分光(guang)光(guang)度計采(cai)用(yong)壹(yi)個可(ke)以(yi)產(chan)生(sheng)多(duo)個波(bo)長(chang)的(de)光(guang)源(yuan)，通(tong)過系(xi)列(lie)分(fen)光(guang)裝置(zhi)，從(cong)而產(chan)生(sheng)特定波(bo)長(chang)的(de)光(guang)源(yuan)，光(guang)線(xian)透過(guo)測試(shi)的(de)樣(yang)品後，部(bu)分(fen)光(guang)線(xian)被吸(xi)收，計(ji)算樣(yang)品的(de)吸(xi)光(guang)值，從(cong)而轉化成樣(yang)品的(de)濃(nong)度。樣(yang)品的(de)吸(xi)光(guang)值與(yu)樣(yang)品的(de)濃(nong)度成正比。
單(dan)色(se)光(guang)輻射(she)穿過被測物(wu)質(zhi)溶(rong)液時，被(bei)該物(wu)質(zhi)吸(xi)收的(de)量與(yu)該物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度和液層的(de)厚(hou)度（光(guang)路長(chang)度）成正比，其(qi)關系(xi)如(ru)下式：
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式(shi)中(zhong) :A 為(wei)吸(xi)光(guang)度；
I0為(wei)入射(she)的(de)單色光(guang)強度；
I 為(wei)透射(she)的(de)單色光(guang)強度；
T 為(wei)物(wu)質(zhi)的(de)透射(she)率(lv)；
k 為(wei)摩(mo)爾(er)吸(xi)收系(xi)數(shu)；
L 為(wei)被分(fen)析物(wu)質(zhi)的(de)光(guang)程，即比色(se)皿的(de)邊長(chang)；
c 為(wei)物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度；
物(wu)質(zhi)對(dui)光(guang)的(de)選擇(ze)性(xing)吸(xi)收波(bo)長(chang)，以(yi)及相應(ying)的(de)吸(xi)收系(xi)數(shu)是(shi)該物(wu)質(zhi)的(de)物(wu)理常數(shu)。當(dang)已知(zhi)某純(chun)物(wu)質(zhi)在(zai)壹(yi)定條(tiao)件下的(de)吸(xi)收系(xi)數(shu)後可(ke)用(yong)同(tong)樣(yang)條(tiao)件將(jiang)該供(gong)試品配成(cheng)溶(rong)液，測定(ding)其(qi)吸(xi)收度,即可(ke)由上(shang)式(shi)計算出供(gong)試(shi)品中該物(wu)質(zhi)的(de)含(han)量。在(zai)可(ke)見光(guang)區，除某些(xie)物(wu)質(zhi)對(dui)光(guang)有吸(xi)收外(wai)，很多(duo)物(wu)質(zhi)本(ben)身(shen)並(bing)沒有吸(xi)收但(dan)可(ke)在(zai)壹(yi)定條(tiao)件下加入顯(xian)色(se)試劑(ji)或經(jing)過處理使其(qi)顯色(se)後再測定(ding),故又(you)稱(cheng)比色(se)分(fen)析。由於(yu)顯(xian)色時影(ying)響(xiang)呈色深(shen)淺(qian)的(de)因素(su)較多(duo)，且常使用(yong)單(dan)色光(guang)純(chun)度較差的(de)儀(yi)器(qi)，故測定(ding)時應(ying)用(yong)標(biao)準品或對(dui)照(zhao)品同時操作。